MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性是一種廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)、藥理學(xué)和毒理學(xué)研究的經(jīng)典比色法，用于評(píng)估細(xì)胞的增殖能力或毒性反應(yīng)。該方法基于活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶(SDH)能將黃色的MTT還原為不溶于水的藍(lán)紫色結(jié)晶——甲臜(Formazan)，其生成量與活細(xì)胞數(shù)量成正比。

　　一、核心原理

　　活細(xì)胞線粒體中的?琥珀酸脫氫酶?能將外源性MTT(噻唑藍(lán))還原為?水不溶性藍(lán)紫色甲瓚結(jié)晶?(Formazan)，其生成量與活細(xì)胞數(shù)量成正比?。死細(xì)胞無此功能，通過?二甲基亞砜(DMSO)溶解結(jié)晶?后，在?570nm波長(zhǎng)?下測(cè)定吸光度(OD值)即可量化細(xì)胞活性?。

　　二、實(shí)驗(yàn)流程要點(diǎn)

　　?細(xì)胞接種?

　　貼壁細(xì)胞：96孔板每孔接種1000~10000個(gè)細(xì)胞，邊緣孔用PBS緩沖液填充以減少蒸發(fā)誤差?。

　　懸浮細(xì)胞：需離心去除培養(yǎng)液后接種?。

　　?MTT處理?

　　終濃度：0.5mg/mL(5mg/mL MTT溶液按1:10稀釋)?。

　　孵育時(shí)間：37℃避光培養(yǎng)4小時(shí)?。

　　?結(jié)晶溶解與檢測(cè)?

　　移除上清液，每孔加入150μL DMSO或?qū)Ｓ萌芙庖?，震?0分鐘?。

　　酶標(biāo)儀檢測(cè)570nm吸光度(推薦范圍0.1~1.0)?。

　　三、關(guān)鍵注意事項(xiàng)

　　?細(xì)胞密度優(yōu)化?：預(yù)實(shí)驗(yàn)確定z佳接種量，避免OD值超出線性范圍?。

　　?血清濃度控制?：培養(yǎng)液胎牛血清濃度需<10%，減少背景干擾?。

　　?MTT保存?：4℃避光保存(鋁箔包裹)，有效期≤2周?。