超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase, SOD)是一種重要的抗氧化酶，能夠催化超氧陰離子自由基(O??)轉化為過氧化氫(H?O?)和氧氣(O?)，從而保護細胞免受活性氧(ROS)的損害。SOD活性測定對于研究其生物學功能、評估生物樣本中的抗氧化能力具有重要意義。以下是幾種常用的SOD酶活測定方法：

　　1. 羥胺法

　　該方法基于SOD抑制由酚類物質在堿性條件下與超氧陰離子反應生成的亞硝基酚(一種藍色化合物)的能力。通過測量560nm波長下的吸光度變化來計算SOD活性。

　　原理：在無SOD存在下，超氧陰離子會與羥胺反應生成一氧化氮，后者可進一步與對氨基苯磺酸作用形成有色產(chǎn)物。而SOD能競爭性地催化超氧陰離子轉化為其他物質，因此可以通過測量有色產(chǎn)物生成量的變化間接測定SOD活性。

　　2. NBT還原法(Nitroblue Tetrazolium)

　　這種方法利用了NBT可以被超氧陰離子還原成不溶于水的藍色甲臜(Formazan)沉淀這一特性。SOD的存在會抑制這種還原作用的發(fā)生。

　　原理：通過光照或化學手段產(chǎn)生超氧陰離子，使得NBT還原為藍色甲臜。SOD可通過清除超氧陰離子減少甲臜的形成。通過比較有無SOD情況下甲臜生成量的差異來確定SOD活性。

　　檢測波長：通常在560nm處測量吸光度。

　　3. 細胞色素C還原法

　　此方法依賴于超氧陰離子能夠將氧化態(tài)的細胞色素C還原為其還原態(tài)，而SOD能夠阻止這一過程。

　　原理：使用黃嘌呤氧化酶系統(tǒng)生成超氧陰離子，它可以還原細胞色素C。SOD的存在會降低細胞色素C的還原速率。通過監(jiān)測550nm波長處吸光度的變化來量化SOD活性。

　　4. 酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)或其它特異性抗體技術

　　雖然這些技術主要用于蛋白質定量而非直接測定酶活性，但它們可用于檢測特定類型的SOD(如Cu/Zn-SOD、Mn-SOD等)的濃度，間接反映其潛在的活性水平。

　　實驗步驟示例(以NBT還原法為例)

　　準備試劑：配制含有NBT的緩沖溶液，并確保所有試劑均處于實驗所需的pH值和溫度條件下。

　　設置對照組和實驗組：包括不含SOD的對照組以及含不同濃度SOD的實驗組。

　　啟動反應：加入適量的黃嘌呤氧化酶或其他超氧陰離子生成系統(tǒng)，開始反應。

　　終止反應并測量吸光度：在預定時間后停止反應，并在560nm波長下測量各組分的吸光度。

　　數(shù)據(jù)分析：根據(jù)吸光度差異計算SOD活性，通常以抑制50%超氧陰離子生成所需的酶量定義為一個單位的SOD活性。