一、簡介

　　蛋白免疫印跡(Western Blot，簡稱WB)是一種能夠從細(xì)胞或組織提取的復(fù)雜蛋白質(zhì)混合物中檢測靶蛋白并對其進(jìn)行半定量的常用實(shí)驗(yàn)技術(shù)，還可以鑒定和定量蛋白質(zhì)中翻譯后修飾的氨基酸。與蛋白質(zhì)科學(xué)中其他常用的分析技術(shù)(如ELISA、IHC、質(zhì)譜法和顯微鏡觀察等)相比，WB可提供有關(guān)蛋白質(zhì)分子量信息，區(qū)分分子量相近的蛋白，適合檢測低豐度蛋白和同時(shí)檢測多個(gè)目的蛋白，并在蛋白質(zhì)純化或評估細(xì)胞中蛋白質(zhì)表達(dá)水平時(shí)具有一定的優(yōu)勢。該方法廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)、生物化學(xué)、免疫遺傳學(xué)等分子生物學(xué)領(lǐng)域。

　　二、原理

　　WB利用 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳 (SDS-PAGE)，將抗體作為探針，標(biāo)記的二抗作為顯色工具，來分離指定樣品中包含的各種蛋白質(zhì)。將分離的蛋白質(zhì)樣品轉(zhuǎn)移到固相載體(如硝酸纖維素或PVDF 膜)上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。接下來，將膜與對感目標(biāo)蛋白質(zhì)的特異抗體一起孵育。在洗膜過程中，未結(jié)合的抗體被洗掉，只留下與目標(biāo)蛋白質(zhì)結(jié)合的抗體，最后通過顯影膠片或熒光掃描來檢測結(jié)合的抗體。

　　根據(jù)原理，蛋白免疫印跡可分為兩種方法：直接法、間接法。

　　表1. 兩種方法的優(yōu)缺點(diǎn)